当前位置:b体育登录入口-b体育官方网站 > 技术文章 > 耗材专区 ezseptm max固相萃取柱应用于牛奶中碘醚柳胺残留量的检测
前言:
碘醚柳胺是卤化水杨酰苯胺类杀吸虫药,可以抑制虫体线粒体的磷酸化过程,从而阻止虫体内三磷酸腺甙(atp)的合成,导致虫体能量代谢的活力迅速减弱而死亡,随着国内驱虫药的广泛应用和研究,发现碘醚柳胺有明显胚胎毒性,食用含有碘醚柳胺的动物性食品会影响身体健康。
本文参照《动物性食品中碘醚柳胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法(征求意见稿)》,利用ezseptm max固相萃取柱(60 mg/3ml,货号:pz12802)净化样液,再通过高效液相色谱串联质谱仪进行检测,建立了一种对牛奶中碘醚柳胺残留量进行分析的方法。
关键词:
牛奶,碘醚柳胺,固相萃取
1 实验过程
1.1仪器与试剂
mprep-spe08手动固相萃取装置,货号:pz0008,北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
e.t.氮吹浓缩仪,货号:c020017,北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
4500质谱系统,sciex公司;
ezseptm max固相萃取柱(60 mg/3ml,货号:pz12802),北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
冷冻离心机,gl-20g-ⅱ,上海安亭科学仪器厂 ;
甲醇(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;
乙腈(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;
甲酸、氨水、三乙胺等化学品均为分析纯或以上规格,购自国药集团化学试剂有限公司。
1.2 工作液配制
碘醚柳胺标准物质:100mg/瓶,购自坛墨质检标准物质中心。
碘醚柳胺标准储备液:取碘醚柳胺标准品适量(相当于有效成分约10mg),精密称取,用乙腈稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为1000μg/ml的碘醚柳胺标准储备液。
碘醚柳胺标准中间液:移取碘醚柳胺标准储备液0.1ml,用乙腈稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为10μg/ml的碘醚柳胺标准中间液。
碘醚柳胺标准使用液:碘醚柳胺标准中间液0.1ml,用乙腈稀释至10ml容量瓶中,配制成浓度为0.1μg/ml的碘醚柳胺标准使用液。
依次移取0.1μg/ml的碘醚柳胺标准使用液0.02、0.1、0.5、2.0、5.0ml,分别置于10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度,得到浓度依次为0.2μg/l、1μg/l、5μg/l、20μg/l、50μg/l的标准系列工作液。
1.3 实验部分
1.3.1 样品制备
取牛奶试样2g,置于50 ml聚丙烯离心管中,加10.0 ml 1%三乙胺乙腈溶液超声提取10 min,8000 r/min离心5 min,收集上清液至另一50 ml离心管中,向残渣中加入8.0 ml 1%三乙胺乙腈溶液,重复提取一次,合并两次上清液,用乙腈定容至20 ml,混匀,待净化。
1.3.2 固相萃取净化
ezseptm max固相萃取柱(60 mg/3ml,货号:pz12802)用5ml乙腈进行活化,取1.3.1待净化液5.0 ml上样,上样结束后用5ml乙腈淋洗萃取柱,再用5ml 5%甲酸乙腈洗脱萃取柱,收集洗脱液,使用e.t.氮吹浓缩仪在45℃下氮气浓缩至近干,加2.0 ml甲醇涡旋混匀,过微孔滤膜后供lc-ms/ms测定。
1.3.3 lc-ms/ms仪器条件
色谱柱:kinetex luna pfp(2.6μm,3*100mm)
检测方式:多反应监测(mrm);
流动相:a:0.1%氨水水溶液 b: 甲醇
流速:0.3ml/min
进样量:5μl
表1流动相梯度洗脱表
时间/min | 流动相a/% | 流动相b/% |
0 | 70 | 30 |
5 | 0 | 100 |
8 | 0 | 100 |
8.1 | 70 | 30 |
10 | 70 | 30 |
2 实验结果
图1 标液色谱图
图2 碘醚柳胺标准曲线
3 结论
本实验使用ezseptm max固相萃取柱(60 mg/3ml,货号:pz12802)对牛奶中碘醚柳胺进行净化,通过高效液相色谱串联质谱仪进行测定,该方法的加标回收率范围89.6%~95.3%,rsd为2.3%,能够满足标准要求。也说明ezseptm max固相萃取柱(60 mg/3ml,货号:pz12802)能很好的完成方法中的净化工作,结果稳定、可靠。
参考文献
[1] 《动物性食品中碘醚柳胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法(征求意见稿)》
表 2 加标回收率
加标浓度μg/kg | 回收率(%) | 平均值 | rsd | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | % | % | |
20 | 91.6 | 91.0 | 89.9 | 89.6 | 90.6 | 95.3 | 91.3 | 2.3 |